تست الایزا (ELISA TEST) چیست؟ 9 مرحله انجام آن

تست الایزا (ELISA TEST)

تست الایزا (ELISA) که مخفف (Enzyme-linked immunosorbent) میباشد، روشی برای تشخیص ایمنی و کشف بیماری های موجود در خون است.

هدف از انجام تست الایزا چیست؟

آزمون الایزا که با نام‌های ELISA یا EIA نیز شناخته می‌شود، نوعی ایمنواسی (immunoassay) است که معمولاً برای تعیین کمیت سطح یک ماده خاص در یک نمونه استفاده می‌شود. نمونه‌هایی که به‌طور معمول در الایزا استفاده می‌شوند، شامل سرم، پلاسما، سوپرناتانت کشت سلول ، بزاق، لیزات سلولی ،محلول‌های بافتی و ادرار هستند.این تست اغلب به عنوان ابزاری برای غربالگری استفاده می‌شود.

کاربرد تست الایزا

از این تست درحالت معمول برای ردیابی آنتی ژن یا آنتی بادی بکار می برند. بدین ترتیب که یکی از این دو ماده در بستر جامد ثابت شده و برای ردیابی دومی بکار گرفته میشود.ست الایزا یک آزمایش استاندارد برای کشف ویروس و اندازه گیری میزان ترشح هورمون ها در خون است و استانداردی جهانی برای استفاده در بیمارستان‌ها٬ بانک خون و سازمان‌های انتقال خون به ویژه در تشخیص ایدز می‌باشد. در الایزا خود ویروس جستجو نمی‌شود بلکه اندازه پادتن (آنتی‌بادی) که در بدن شخص آلوده به یک ویروس(مانندHIV) تولید شده٬ اندازه گرفته می‌شود.

برای تشخیص چه مواردی از تست الایزا استفاده می شود؟

سفلیس
توکسوپلاسموز
ویروس زیکا
اچ ای وی (HIV)
روتا ویروس
کم خونی پرنیشیوز
ویروس واریسلا-زوستر (عامل بیماری زونا و آبله مرغان )
ویروس زیکا
بیماری لایم
تب منقوط کوه‌های راکی

4 تکنیک الایزا

تست الایزا چهار نوع اصلی دارد که هرکدام مزایا ، معایب خاصی دارند. این ۴ تکنیک عبارتند از:

الایزا مستقیم (Direct ELISA)
الایزا غیرمستقیم (Indirect ELISA)
الایزا ساندویچ (Sandwich ELISA)
الایزا رقابتی (Competitive ELISA)

مراحل انجام تست الایزا

1- مرحله کوتینگ

شامل Coating آنتی ژن یا آنتی بادی اختصاصی در کف چاهکها است که توسط کارخانه سازنده کیت انجام می شود.

۲- مرحله بلاکینگ

در این مرحله فضاهای خالی بین آنتی ژنها یا آنتی بادی های coat شده در کف چاهک، با یک پروتئین خنثی پر می شود. که توسط تولید کننده کیت انجام میگیرد. آلبومین سری گاوی از رایج‌ترین بلاک کننده ها می‌باشد.

۳- مرحله سمپلینگ

این مرحله از تست الایزا سرم بیمار و یا معرفهای دیگر نظیر استانداردها و کنترلها، درون چاهکها ریخته میشود.

۴- انکوباسیون

انکوباسیون به معنای مدت زمان مشخص در درجه حرارت مشخص میباشد. معمولا در دمای ۲۵ یا ۳۷ درجه صورت میگیرد. در این فرآیند آنتی ژنها و آنتی بادی های موجود در چاهک ها با هم واکنش نشان دهند.

۵- اضافه کردن معرف نشاندار (Conjugate)

این مرحله معرف نشاندار شده با آنزیم که به کانژوگه معروف است به منظور نشاندار کردن واکنشهای آنتی ژن و آنتی بادی افزوده می شود.

۶- شستشو چاهک ها

در این مرحله با محلول شستشوی کیت، درون چاهک ها شستشو داده میشود ، تا آنتی ژنها و آنتی بادی های غیر اختصاصی که در واکنش شرکت نکرده آمد و OD کاذب ایجاد میکنند، از محیط چاهک ها تخلیه شوند. این مرحله توسط دستگاه الایزا واشر صورت می گیرد.

۷- اضافه کردن سوبسترا

در این مرحله از تست الایزا یک معرف دیگر به چاهک ها اضافه میشود که سوبسترا نام دارد. سوبسترا با کانژوگه واکنش نشان داده و سبب تشکیل رنگ درون چاهک ها می گردد.

۸- اضافه کردن محلول استاپ (Stop)

در ادامهاین تست یک معرف دیگر به نام Stop به چاهک ها اضافه میشود. این معرف سبب متوقف کردن واکنش آنزیمی و در نتیجه جلوگیری از افزایش رنگ درون چاهک ها می گردد.

۹- مرحله خوانش

در این مرحله میزان جذب محتوای چاهک ها به کمک دستگاه الایزا ریدر در طول موج های مشخص اندازه گیری می شود .

نکته هایی که نباید دراین تست فراموش کرد

قبل از شروع آزمایش ، درک کاملی از آن داشته باشید
شستشوی مناسب در هر مرحله الزامی است
کیت مناسب را انتخاب کنید
به نحوه صحیح آماده‌سازی نمونه توجه کنید
تکنیکهای مناسبی که قبلا به آن اشاره شد را انتخاب کنید

ممنون از اینکه با ما همراه بودین، سوالات و نظرات خودتون رو درباره تست الایزا انتهای همین صفحه برای ما کامنت کنید

شاید برایتان جالب باشد که بدانید:

[button type=”round” color=”red” target=”” link=”http://sabiolab.ir/%d9%85%d9%82%d8%a7%d9%84%d9%87-%d9%87%d8%a7/%d9%85%d8%ad%db%8c%d8%b7-%da%a9%d8%b4%d8%aa-%d8%a8%d9%84%d8%a7%d8%af-%d8%a2%da%af%d8%a7%d8%b1/”]طرز تهیه محیط کشت بلادآگار[/button]

[button type=”round” color=”red” target=”” link=”http://sabiolab.ir/%d9%85%d9%82%d8%a7%d9%84%d9%87-%d9%87%d8%a7/%d8%b3%d8%a7%d9%81%d8%b1%d8%a7%d9%86%db%8c%d9%86-%da%86%db%8c%d8%b3%d8%aa/”]سافرانین چیست و کاربرد آن چگونه می باشد؟[/button]

[button type=”round” color=”red” target=”” link=”http://sabiolab.ir/blog/%d8%a8%d8%a7%d8%b2%d8%a7%d8%b1%da%a9%d8%a7%d8%b1-%d8%a7%d8%b1%d8%b4%d8%af-%d8%b1%d8%b4%d8%aa%d9%87-%d8%b3%d9%85-%d8%b4%d9%86%d8%a7%d8%b3%db%8c/”]بازارکار،هدف و آینده شغلی کارشناسی ارشد رشته سم شناسی[/button]

وبلاگ